Particules Lentivirales d'Activation (m) C1QBP: sc-419387-LAC

C1qbp code la protéine de liaison à la sous-unité q du composant 1 du complément (C1QBP), une protéine mitochondriale multifonctionnelle qui se localise également dans d’autres compartiments cellulaires et participe à la biogenèse des ribosomes, au traitement de l’ARN mitochondrial et au maintien de l’homéostasie de la phosphorylation oxydative. C1QBP soutient la bioénergétique cellulaire et l’adaptation au stress, en reliant la traduction mitochondriale et la fonction de la chaîne respiratoire à des programmes plus larges de signalisation métabolique et d’immunité innée. Une dérégulation de C1QBP a été associée, dans des modèles expérimentaux, à une altération de la fonction mitochondriale, à des réponses inflammatoires et à des phénotypes de survie cellulaire pertinents pour la neurodégénérescence, les dysfonctionnements cardiométaboliques et la biologie du cancer. Dans les systèmes murins, C1QBP est fréquemment étudiée dans le contexte de l’intégrité mitochondriale, de la gestion des ROS (espèces réactives de l’oxygène) et des voies liées à l’apoptose.

Les particules d'activation lentivirales C1QBP (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de C1qbp dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales C1QBP (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription C1qbp, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de C1QBP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif C1qbp ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.