C1q-C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419388

Descripción general

C1qc codifica la cadena C del componente del complemento C1q, una molécula de reconocimiento que inicia la vía clásica del complemento mediante su asociación con C1r y C1s y su unión a complejos inmunes, células apoptóticas y estructuras propias alteradas. En el ratón, C1q contribuye a la vigilancia inmunitaria innata al promover la opsonización, la eliminación fagocítica y la modulación de la señalización inflamatoria, con efectos posteriores sobre la activación de la cascada del complemento y las redes de citocinas. Los procesos dependientes de C1q-C se estudian con frecuencia en la biología de macrófagos y microglía, incluida la remodelación sináptica y la homeostasis tisular, donde el marcaje mediado por el complemento puede influir en los mecanismos de poda y eliminación celular. La actividad desregulada de C1q y la activación del complemento se asocian a fenotipos inflamatorios y neuroinmunes relevantes para modelos de investigación de autoinmunidad, respuestas a infecciones y neurodegeneración.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C1q-C (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen C1qc en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del C1qc junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de C1qc tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C1q-C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en C1qc para la investigación de la señalización de C1q-C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de C1qc críticos para la función de C1q-C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de C1qc para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C1q-C CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido C1q-C CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus C1qc. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C1q-C (m) y el plásmido HDR C1q-C (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología C1qc para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana C1qc definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.