Plásmido CRISPR de Activación (h) C15orf39: sc-412724-ACT

C15orf39 codifica una proteína humana poco caracterizada y con anotación funcional limitada, pero la evidencia disponible respalda un papel en procesos fundamentales de homeostasis celular, como la regulación de la expresión génica y el recambio proteico. Observaciones transcriptómicas y proteómicas sugieren que C15orf39 podría participar en vías que influyen en la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la adaptación mitocondrial o metabólica, según el contexto celular. Se han reportado alteraciones en la expresión de C15orf39 en determinados conjuntos de datos asociados a enfermedades, lo que indica una posible relevancia para programas de proliferación desregulada y mantenimiento del genoma. En consecuencia, la sobreexpresión controlada de C15orf39 resulta útil para explorar redes transcripcionales aguas abajo y dependencias de vías en modelos de células humanas.

C15orf39 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C15orf39 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C15orf39 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C15orf39 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C15orf39, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C15orf39. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C15orf39 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C15orf39 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C15orf39 en células tumorales con expresión de C15orf39 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.