Plásmido CRISPR de Activación (m) c-Fgr: sc-420347-ACT

El gen Fgr en ratón codifica c-Fgr, una tirosina quinasa no receptora de la familia Src enriquecida en linajes mieloides que transduce señales aguas abajo de inmunorreceptores, integrinas y estímulos de citocinas para coordinar las respuestas inmunitarias innatas. c-Fgr participa en cascadas de fosforilación que regulan la remodelación del citoesqueleto de actina, la adhesión y migración celular, la fagocitosis y la producción de especies reactivas de oxígeno, integrándose con vías como la señalización del receptor Fc y redes de quinasas inflamatorias. La actividad desregulada de las quinasas de la familia Src, incluida la señalización alterada de Fgr, se ha vinculado a una activación leucocitaria aberrante y a fenotipos inflamatorios, lo que convierte a Fgr en un nodo útil para estudiar la homeostasis inmunitaria y la función de las células mieloides. En biología del cáncer, la expresión y la señalización de Fgr también se investigan por su posible papel en células mieloides asociadas a tumores y en la dinámica de señalización del microambiente.

c-Fgr El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Fgr sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

c-Fgr El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Fgr en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Fgr, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de c-Fgr. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Fgr y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de c-Fgr en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía c-Fgr en células tumorales con expresión de Fgr silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.