C/EBP δ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400772

Übersicht

CEBPD kodiert den Transkriptionsfaktor C/EBPδ, ein basisches Leucin-Zipper-Protein, das Genexpressionsprogramme reguliert, die mit der angeborenen Immun-Signalübertragung, zellulären Stressantworten und Differenzierung verknüpft sind. C/EBPδ wird durch inflammatorische Signale induziert und ist Teil transkriptioneller Netzwerke nachgeschaltet von Zytokin- und Toll-like-Rezeptor-Signalwegen; dabei prägt es die Expression von Mediatoren, die an Akutphasenreaktionen und myeloiden Funktionen beteiligt sind. Es wirkt außerdem an der Kontrolle des Zellzyklus und an Überlebenssignalwegen mit und trägt so zu einer kontextabhängigen Regulation von Proliferation, Seneszenz und metabolischer Anpassung bei. Eine fehlregulierte CEBPD-Aktivität wurde bei entzündlichen Erkrankungen sowie in mehreren Krebszusammenhängen beschrieben, was CEBPD als mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle in krankheitsrelevanten Signalzuständen nahelegt.

Das C/EBP δ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CEBPD-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CEBPD-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CEBPD nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C/EBP δ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CEBPD-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C/EBP δ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CEBPD-Exone abzielen, die für die C/EBP δ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CEBPD-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C/EBP δ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom C/EBP δ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CEBPD-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C/EBP δ HDR-Plasmid (h) und C/EBP δ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CEBPD-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CEBPD-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.