C/EBP δ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400772

Panoramica

CEBPD codifica il fattore di trascrizione C/EBPδ, una proteina bZIP (basic leucine zipper) che regola programmi di espressione genica legati alla segnalazione dell’immunità innata, alle risposte allo stress cellulare e alla differenziazione. C/EBPδ è indotto da stimoli infiammatori e partecipa a reti trascrizionali a valle delle vie delle citochine e dei recettori Toll-like, modulando l’espressione di mediatori coinvolti nelle funzioni di fase acuta e in processi associati alla linea mieloide. Interagisce inoltre con i meccanismi di controllo del ciclo cellulare e con le vie di sopravvivenza, contribuendo a una regolazione dipendente dal contesto di proliferazione, senescenza e adattamento metabolico. Un’attività deregolata di CEBPD è stata riportata in diverse condizioni infiammatorie e in molteplici contesti oncologici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per studiare il controllo trascrizionale in stati di segnalazione rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C/EBP δ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CEBPD in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CEBPD insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CEBPD a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C/EBP δ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CEBPD per lo studio della segnalazione di C/EBP δ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CEBPD critici per la funzione di C/EBP δ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CEBPD per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C/EBP δ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal C/EBP δ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CEBPD. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C/EBP δ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR C/EBP δ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CEBPD per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CEBPD definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.