C/EBP δ CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419624-ACT

Cebpd kodiert den Transkriptionsfaktor C/EBP Delta (CEBPδ), ein Mitglied der CCAAT/Enhancer-Binding-Protein-Familie, die stimuli-responsive Genexpressionsprogramme in Immun- und Stromakompartimenten koordiniert. In Mauszellen wird C/EBPδ durch inflammatorische Signale und zellulären Stress rasch induziert; dabei integriert es Signale aus zytokingetriebenen Signalwegen und nachgeschalteten transkriptionellen Netzwerken, um Differenzierung, Akutphasenreaktionen und die Kontrolle des Zellzyklus zu regulieren. Über seine DNA-Bindungs- und Transaktivierungsdomänen formt C/EBPδ chromatinzugängliche Enhancer und moduliert Gene, die an angeborener Immunität, Stoffwechsel und Gewebeumbau beteiligt sind. Eine fehlregulierte Cebpd-Aktivität wurde mit inflammatorischer Pathobiologie und veränderten proliferativen Zuständen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien stressresponsiver transkriptioneller Schaltkreise macht.

C/EBP δ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cebpd-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

C/EBP δ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cebpd-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cebpd-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen C/EBP δ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cebpd-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von C/EBP δ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des C/EBP δ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cebpd-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.