Plasmide CRISPR d'Activation (m) C/EBP δ: sc-419624-ACT

Cebpd code le facteur de transcription C/EBP delta (C/EBPδ), membre de la famille des protéines CCAAT/enhancer-binding, qui coordonne des programmes d’expression génique dépendants des stimuli au sein des compartiments immunitaire et stromal. Dans les cellules de souris, C/EBPδ est rapidement induit par des signaux inflammatoires et par le stress cellulaire ; il intègre alors les signaux issus des voies activées par les cytokines et des réseaux transcriptionnels en aval pour réguler la différenciation, les réponses de phase aiguë et le contrôle du cycle cellulaire. Grâce à ses domaines de liaison à l’ADN et de transactivation, C/EBPδ façonne des enhancers accessibles au niveau de la chromatine et module l’expression de gènes impliqués dans l’immunité innée, le métabolisme et le remodelage tissulaire. Une activité dérégulée de Cebpd a été associée à des processus pathologiques inflammatoires et à des états prolifératifs altérés, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques des circuits transcriptionnels de réponse au stress.

C/EBP δ Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cebpd sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C/EBP δ Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cebpd dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cebpd, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C/EBP δ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cebpd natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C/EBP δ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C/EBP δ dans les cellules tumorales présentant une expression de Cebpd silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.