C/EBP beta CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400125-ACT

CEBPB kodiert den Transkriptionsfaktor C/EBP beta, ein basisches Leucin-Zipper-Protein, das stimulusresponsive Genprogramme reguliert, welche Entzündung, angeborene Immun-Signalgebung, Zellzyklusprogression und zelluläre Differenzierung steuern. C/EBP beta integriert Signale aus Zytokin- und Stresswegen, darunter NF-κB-, JAK/STAT- und MAPK-Signalwege, um transkriptionelle Outputs zu modulieren, die die Aktivierung von Makrophagen, die Adipogenese und die Plastizität epithelialer Zellen prägen. Eine veränderte CEBPB-Aktivität wurde mit fehlregulierten Entzündungszuständen und Umbauprozessen in Verbindung gebracht und wird häufig in Kontexten wie metabolischer Dysfunktion, Fibrose und onkogenen Transkriptionsnetzwerken untersucht. Diese Eigenschaften machen C/EBP beta zu einem zentralen Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie extrazelluläre Signale in abstammungs- und kontextspezifische Genexpressionsprogramme übersetzt werden.

C/EBP beta Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CEBPB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

C/EBP beta Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CEBPB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CEBPB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen C/EBP beta-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CEBPB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von C/EBP beta-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des C/EBP beta-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CEBPB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.