C/EBP α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419621

Übersicht

Cebpa kodiert den Transkriptionsfaktor C/EBPα, einen basischen Leucin-Zipper‑Regulator, der in mehreren Geweben die Festlegung der Zelllinie und die terminale Differenzierung koordiniert, mit besonders wichtigen Funktionen in der Entwicklung myeloischer Zellen und von Adipozyten. In hämatopoetischen Zellen integriert C/EBPα Signaleingänge, um den Austritt aus dem Zellzyklus und Reifungsprogramme zu steuern, indem es transkriptionelle Netzwerke moduliert, die Proliferation und Differenzierung regulieren. Es interagiert mit Signalwegen der Stoffwechselregulation, der Expression inflammatorischer Gene und des Chromatin-Remodelings und beeinflusst dadurch die zelluläre Identität und Stressantworten. Eine dysregulierte C/EBPα‑Aktivität wird in Mausmodellen häufig im Zusammenhang mit gestörter Differenzierung, veränderter Immunhomöostase und Mechanismen hämatologischer Erkrankungen untersucht.

Das C/EBP α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cebpa-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cebpa-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cebpa nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C/EBP α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cebpa-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C/EBP α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cebpa-Exone abzielen, die für die C/EBP α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cebpa-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C/EBP α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom C/EBP α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cebpa-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C/EBP α HDR-Plasmid (m) und C/EBP α HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cebpa-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cebpa-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.