Plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Abl (m): sc-418935

Présentation

Le gène murin Abl1 code la tyrosine kinase non réceptrice c-Abl, une protéine de signalisation multifonctionnelle qui intègre des signaux provenant des récepteurs aux facteurs de croissance, des intégrines et du stress génotoxique afin de réguler la prolifération, le remodelage du cytosquelette, l’adhésion et l’apoptose. L’activité de c-Abl influence des voies contrôlant la dynamique de l’actine et le renouvellement des adhérences focales, et elle participe à la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN via des interactions protéiques dépendantes de la phosphorylation dans le noyau. Une dérégulation de la signalisation d’Abl1 et une altération de l’activité kinase de c-Abl sont largement impliquées dans la transformation oncogénique et des programmes aberrants de survie cellulaire, faisant d’Abl1 un nœud clé pour l’étude des réseaux de signalisation dépendants des kinases. Dans des modèles murins, la perturbation d’Abl1 permet d’explorer les mécanismes du développement, de la fonction des cellules immunitaires et des phénotypes de réponse au stress liés à la signalisation des tyrosine kinases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Abl (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Abl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Abl1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Abl1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine c-Abl.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Abl1 pour l'étude de la signalisation de c-Abl, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Abl1 essentiels à la fonction de c-Abl
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Abl1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le c-Abl plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le c-Abl plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Abl1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le c-Abl plasmide HDR (m) et le c-Abl (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Abl1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Abl1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.