Plasmide CRISPR d'Activation (h) BVES: sc-403698-ACT

BVES (blood vessel epicardial substance), également connu sous le nom de POPDC1, code une protéine associée à la membrane, particulièrement abondante dans les tissus cardiaques et épithéliaux, qui agit comme régulateur de l’adhésion cellule–cellule et du trafic membranaire via sa capacité de liaison à l’AMPc. BVES participe à l’organisation des jonctions et au remodelage du cytosquelette, influençant l’intégrité épithéliale, la migration et les phénotypes de conduction électrique dans le muscle strié. En modulant la signalisation dépendante de l’AMPc et les interactions d’échafaudage associées, BVES contribue à l’homéostasie tissulaire et aux réponses au stress. Des altérations de l’expression ou de la localisation de BVES ont été associées à des défauts de fonction de barrière épithéliale et à des phénotypes liés à la conduction cardiaque, soulignant sa pertinence pour les études mécanistiques des voies impliquées dans la cardiomyopathie et la dérégulation épithéliale.

BVES Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BVES sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BVES Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BVES dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BVES, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BVES. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BVES natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BVES au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BVES dans les cellules tumorales présentant une expression de BVES silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.