BTBD4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-428253

Übersicht

Zbtb46 kodiert das BTBD4-Protein, einen BTB/POZ-Domäne enthaltenden Faktor, der an Transkriptionsregulationsprogrammen beteiligt ist, die Zellidentität und Differenzierungszustände in Mausgeweben prägen. In der Immunbiologie wird die Zbtb46-Expression häufig als Marker der klassischen dendritischen Zelllinie verwendet, und seine regulatorische Aktivität wird im Kontext von Antigenpräsentation, inflammatorischer Signalübertragung und homöostatischer Immunüberwachung untersucht. Veränderte Zbtb46-assoziierte Gennetzwerke wurden in Modellen der tumorassoziierten Immunität und entzündlicher Erkrankungen analysiert, in denen Verschiebungen der dendritischen Zellfunktion Zytokinprofile und das Priming von T‑Zellen beeinflussen können. Daher ist die Störung von Zbtb46/BTBD4 ein nützlicher Ansatz, um transkriptionelle Schaltkreise zu untersuchen, die Differenzierung, angeborene Immunwege und mikroumgebungsabhängige Antworten miteinander verbinden.

Das BTBD4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Zbtb46-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Zbtb46-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Zbtb46 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BTBD4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Zbtb46-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BTBD4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Zbtb46-Exone abzielen, die für die BTBD4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Zbtb46-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BTBD4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom BTBD4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Zbtb46-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BTBD4 HDR-Plasmid (m) und BTBD4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Zbtb46-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Zbtb46-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.