Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
BTBD14B Plasmide Double Nickase (m): sc-426213-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BTBD14B Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BTBD14B Double Nickase Plasmid (m) e il BTBD14B Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Nacc1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BTBD14B Antibody (E-3): sc-376216
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BTBD14B Plasmide Double Nickase (m) | sc-426213-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BTBD14B Plasmide Double Nickase (m2) | sc-426213-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Nacc1 nel topo codifica BTBD14B, una proteina nucleare contenente un dominio BTB/POZ implicata nella regolazione trascrizionale attraverso interazioni proteina‑proteina e l’assemblaggio di complessi repressivi o modulatori. BTBD14B è stata collegata al controllo di programmi dello stato cellulare, inclusi proliferazione, differenziamento ed espressione genica in risposta allo stress, in linea con ruoli nella regolazione associata alla cromatina e in vie di turnover proteico legate all’ubiquitina. La disregolazione di Nacc1/BTBD14B è stata associata in letteratura ad alterazioni del controllo del ciclo cellulare e della segnalazione di sopravvivenza, rendendola un nodo utile per studiare reti trascrizionali dipendenti dal contesto nello sviluppo e in fenotipi cellulari rilevanti per la malattia.
BTBD14B Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nacc1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nacc1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nacc1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nacc1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.