BTBD14B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410250-ACT

NACC1 kodiert einen nukleären Transkriptionsregulator mit BTB/POZ-Domäne, der an der chromatinassoziierten Steuerung von Genexpressionsprogrammen beteiligt ist, welche Proliferation, Differenzierung und zelluläre Stressantworten beeinflussen. Über Interaktionen mit Korepressorkomplexen und der Transkriptionsmaschinerie wurde NACC1 mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die den Zellzyklusfortschritt, die epithelial-mesenchymale Transition und die metabolische Anpassung regulieren. Eine veränderte NACC1-Aktivität wurde in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, insbesondere in der Krebsbiologie, wo sie mit Veränderungen der Fitness von Tumorzellen, invasionsbezogenen Phänotypen und Signaturen des Therapieansprechens assoziiert ist. Diese Eigenschaften machen NACC1/BTBD14B zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die Umverdrahtung transkriptioneller Netzwerke und die Regulation von Linien- bzw. Zellzuständen in humanen Modellsystemen zu untersuchen.

BTBD14B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NACC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BTBD14B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NACC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NACC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BTBD14B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NACC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BTBD14B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BTBD14B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NACC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.