Plásmido CRISPR de Activación (h) BTBD12: sc-404395-ACT

SLX4 (BTBD12) codifica una proteína andamiaje multifuncional que coordina endonucleasas específicas de estructura durante la reparación de enlaces cruzados intercatenarios del ADN y la resolución de intermediarios de replicación detenidos. Integra actividades de señalización y enzimáticas a través de la vía de la anemia de Fanconi y la recombinación homóloga, contribuyendo a la estabilidad del genoma durante la fase S y a la recuperación frente al estrés replicativo. BTBD12 interactúa con complejos de nucleasas como XPF–ERCC1, MUS81–EME1 y SLX1 para promover el corte adecuado del ADN y el procesamiento de uniones de Holliday. La alteración o desregulación de las redes de reparación asociadas a SLX4 se vincula con fenotipos de inestabilidad cromosómica y defectos en la respuesta al daño del ADN relevantes para el cáncer, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar las vías de estrés genotóxico.

BTBD12 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLX4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BTBD12 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLX4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLX4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BTBD12. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLX4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BTBD12 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BTBD12 en células tumorales con expresión de SLX4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.