Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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BSPII Double Nickase Plasmid (h): sc-402368-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BSPII Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BSPII Double-Nickase-Plasmid (h) und BSPII Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IBSP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BSPII: sc-73634
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BSPII Double Nickase Plasmid (h) | sc-402368-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BSPII Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402368-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Integrin-bindendes Sialoprotein (IBSP), auch bekannt als Bone Sialoprotein II (BSPII), ist ein sezerniertes, stark phosphoryliertes Glykoprotein der SIBLING-Familie, das in mineralisierten Geweben angereichert ist und in der extrazellulären Matrix abgelagert wird. Über sein RGD-Motiv und Interaktionen mit Hydroxylapatit fördert BSPII die Adhäsion von Osteoblasten, die Organisation der Matrix sowie die Keimbildung von Hydroxylapatit während Knochenbildung und -remodellierung. Die IBSP-Aktivität greift in integrinvermittelte Signalwege und Programme des Umbaus der extrazellulären Matrix ein, die Zellmigration und osteogene Differenzierung beeinflussen. Eine fehlregulierte IBSP/BSPII-Expression wurde mit verändertem Knochenumsatz in Verbindung gebracht und wird häufig als Marker und funktioneller Regulator in Studien zu Tumor–Knochen-Interaktionen und zur Biologie von Knochenmetastasen untersucht.
BSPII Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IBSP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IBSP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IBSP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IBSP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.