Particules Lentivirales d'Activation (h) BRWD1: sc-405121-LAC

BRWD1 (bromodomain and WD repeat domain containing 1) code une protéine associée à la chromatine qui intègre la reconnaissance des histones acétylées médiée par le bromodomaine et des interactions protéiques dépendantes des répétitions WD, afin de façonner les programmes transcriptionnels. BRWD1 a été associé à la régulation de l’accessibilité de la chromatine, à l’expression génique spécifique de certains types cellulaires et à des processus de développement, notamment des rôles dans la différenciation des lignées germinales et immunitaires. Par sa fonction dans le contrôle épigénétique et la régulation transcriptionnelle, l’altération de l’activité de BRWD1 est étudiée dans des contextes de prolifération dérégulée, de défauts de différenciation et d’états d’expression génique liés à des maladies, pertinents pour l’oncologie et l’immunobiologie.

Les particules d'activation lentivirales BRWD1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de BRWD1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BRWD1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription BRWD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BRWD1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif BRWD1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.