Plásmido CRISPR de Activación (m) BRWD1: sc-430062-ACT

Brwd1 codifica la proteína de ratón BRWD1, que contiene un bromodominio y repeticiones WD; es un factor nuclear asociado a la cromatina que reconoce histonas acetiladas y favorece la regulación epigenética de la transcripción. BRWD1 cumple funciones establecidas en el desarrollo de las células germinales y en la progresión meiótica, y contribuye a programas de expresión génica específicos de linaje en células inmunitarias, incluida la diferenciación de las células B. A través de sus bromodominios y repeticiones WD, BRWD1 se asocia con la remodelación de la cromatina, el control transcripcional y la regulación génica coordinada con el ciclo celular. La desregulación de los estados de cromatina asociados a BRWD1 es relevante para el estudio de defectos del desarrollo, fenotipos de infertilidad y alteraciones del sistema inmunitario en modelos murinos.

BRWD1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Brwd1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BRWD1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Brwd1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Brwd1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BRWD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Brwd1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BRWD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BRWD1 en células tumorales con expresión de Brwd1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.