Plasmide CRISPR/Cas9 KO Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h): sc-400382

Présentation

POU4F2 (Brn-3b/BRN3B) code un facteur de transcription à domaine POU qui régule des programmes d’expression génique spécifiques de certains types cellulaires, avec des rôles majeurs dans la différenciation neuronale et le maintien de l’identité des neurones sensoriels, en particulier des cellules ganglionnaires de la rétine. En se liant à des motifs d’ADN de type octamère, BRN3B coordonne des réseaux transcriptionnels qui contrôlent le développement, la survie et les réponses au stress, en interaction avec des voies plus larges de régulation transcriptionnelle qui orientent les décisions de destinée cellulaire. Une activité altérée de POU4F2 a été associée à une différenciation dérégulée ainsi qu’à des modifications dépendantes du contexte de la prolifération et de l’apoptose, ce qui en fait un élément pertinent pour l’étude des mécanismes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi que du remodelage transcriptionnel associé au cancer. En tant que facteur définissant une lignée, il est fréquemment utilisé comme marqueur et comme nœud fonctionnel dans des modèles qui interrogent l’identité neuronale et la transcription dépendante des stimuli.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POU4F2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POU4F2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POU4F2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Brn-3b/BRN3B/POU4F2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POU4F2 pour l'étude de la signalisation de Brn-3b/BRN3B/POU4F2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POU4F2 essentiels à la fonction de Brn-3b/BRN3B/POU4F2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POU4F2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Brn-3b/BRN3B/POU4F2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Brn-3b/BRN3B/POU4F2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POU4F2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Brn-3b/BRN3B/POU4F2 plasmide HDR (h) et le Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POU4F2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POU4F2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.