Brn-3b/BRN3B/POU4F2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400382

Panoramica

POU4F2 (Brn-3b/BRN3B) codifica un fattore di trascrizione con dominio POU che regola programmi di espressione genica specifici per tipo cellulare, con ruoli di primo piano nella differenziazione neuronale e nel mantenimento dell’identità dei neuroni sensoriali, in particolare nelle cellule gangliari della retina. Legandosi a motivi di DNA simili all’octamer, BRN3B coordina reti trascrizionali che controllano sviluppo, sopravvivenza e risposte allo stress, interfacciandosi con vie più ampie di regolazione trascrizionale che orientano le decisioni sul destino cellulare. Alterazioni dell’attività di POU4F2 sono state associate a una differenziazione deregolata e a cambiamenti dipendenti dal contesto nella proliferazione e nell’apoptosi, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi neuroevolutivi e neurodegenerativi, nonché del rimodellamento trascrizionale associato al cancro. In quanto fattore definente di linea cellulare, è spesso utilizzato come marcatore e come nodo funzionale in modelli che indagano l’identità neuronale e la trascrizione dipendente dagli stimoli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POU4F2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POU4F2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POU4F2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Brn-3b/BRN3B/POU4F2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POU4F2 per lo studio della segnalazione di Brn-3b/BRN3B/POU4F2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POU4F2 critici per la funzione di Brn-3b/BRN3B/POU4F2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POU4F2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Brn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Brn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POU4F2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Brn-3b/BRN3B/POU4F2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POU4F2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POU4F2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.