BRD9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430581

Panoramica

Il gene Brd9 del topo codifica BRD9, un lettore della cromatina contenente un bromodominio che riconosce i segni di acetilazione della lisina sugli istoni e contribuisce al rimodellamento della cromatina dipendente da ATP. BRD9 è un componente distintivo dei complessi BAF non canonici (ncBAF/GBAF) e supporta la regolazione di enhancer e promotori, nonché programmi trascrizionali che controllano la proliferazione, la specificazione di linea e l’identità cellulare. Attraverso queste funzioni epigenetiche, BRD9 influenza vie collegate alle risposte al danno al DNA, al controllo del ciclo cellulare e alle transizioni dello stato di differenziamento. Un rimodellamento della cromatina e una circuiteria trascrizionale associati a BRD9 deregolati sono stati implicati in contesti rilevanti per dipendenze oncogeniche e fenotipi dello sviluppo, rendendo BRD9 un nodo utile per studi meccanicistici in modelli di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BRD9 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Brd9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Brd9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Brd9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BRD9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Brd9 per lo studio della segnalazione di BRD9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Brd9 critici per la funzione di BRD9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Brd9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BRD9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BRD9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Brd9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BRD9 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BRD9 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Brd9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Brd9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.