BRD2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402584-LAC

BRD2 codifica la proteina 2 contenente bromodomini, un “lettore” della cromatina della famiglia BET che si lega agli istoni acetilati per coordinare l’inizio e l’allungamento della trascrizione. BRD2 contribuisce a regolare la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e i programmi genici infiammatori attraverso interazioni con complessi trascrizionali e con il macchinario di rimodellamento della cromatina. Partecipa al controllo epigenetico dell’espressione genica in vie collegate alla proliferazione e alla segnalazione immunitaria, e un’alterata attività di BRD2 è stata associata a stati trascrizionali deregolati osservati nel cancro e nei disturbi infiammatori. Queste caratteristiche rendono BRD2 un bersaglio rilevante per lo studio della trascrizione dipendente dalla cromatina, della funzione degli enhancer e della regolazione genica responsiva agli stimoli nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BRD2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BRD2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BRD2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BRD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BRD2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BRD2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.