Plasmide Double Nickase (h) BRAP: sc-403847-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BRAP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BRAP Double Nickase (h) et le plasmide BRAP Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BRAP. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BRAP Antibody (D-5): sc-166012
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BRAP | sc-403847-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BRAP | sc-403847-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRAP (protéine associée à BRCA1) est une ligase E3 de l’ubiquitine cytoplasmique qui module la signalisation MAPK en se liant à des composants tels que KSR1 et en les ubiquitinant, façonnant ainsi l’amplitude et la durée de la voie RAF–MEK–ERK. Grâce à un contrôle dépendant de l’ubiquitine de la stabilité et du trafic des protéines, BRAP influence la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la signalisation en réponse au stress. Des études génétiques et fonctionnelles ont établi un lien entre des perturbations de BRAP et une signalisation proliférative altérée ainsi qu’une protéostasie dérégulée, des processus pertinents pour la biologie du cancer et les mécanismes des maladies neurovasculaires. Son rôle à l’interface entre l’ubiquitination et la régulation de la voie MAPK fait de BRAP un nœud utile pour disséquer les réseaux de transduction du signal et de renouvellement des protéines dans les cellules humaines.
BRAP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BRAP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BRAP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BRAP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BRAP.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.