BPI Double Nickase Plasmid (h): sc-404909-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BPI Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BPI Double-Nickase-Plasmid (h) und BPI Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BPI abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BPI: sc-514212
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BPI Double Nickase Plasmid (h) | sc-404909-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BPI Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404909-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes BPI (bakterizides/permeabilitätssteigerndes Protein) ist ein Protein aus neutrophilen Granula, das an Lipopolysaccharid (LPS) auf gramnegativen Bakterien bindet, die Endotoxinaktivität neutralisiert und die Abtötung der Bakterien fördert. Es ist an der angeborenen Immunabwehr an mukosalen und systemischen Orten beteiligt, indem es entzündliche Signale nachgeschaltet an die LPS-Erkennung moduliert, einschließlich Signalwege, die in die Zytokinproduktion und die Aktivierung myeloider Zellen münden. Variationen in der BPI-Expression oder -Funktion wurden im Zusammenhang mit entzündlichen Atemwegserkrankungen, Infektionen bei Mukoviszidose, sepsisassoziierter Endotoxämie und anderen Zuständen untersucht, bei denen fehlregulierte Wirt–Pathogen-Interaktionen zur Pathologie beitragen. Die experimentelle Beeinflussung von BPI unterstützt mechanistische Studien zur antimikrobiellen Barrierefunktion, zur Neutrophilenbiologie und zu LPS-getriebenen Entzündungsantworten.
BPI Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BPI-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BPI abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BPI-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BPI-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.