Plásmido Doble Nickase (h) Blr1: sc-402672-NIC

CXCR5 codifica el receptor de quimiocinas Blr1 (CD185), un GPCR de siete dominios transmembrana que se une a CXCL13 para dirigir a las células B y a las células T colaboradoras foliculares hacia los folículos de células B y los centros germinales. La unión del ligando activa la señalización de proteínas G heterotriméricas con vías downstream como PI3K–AKT, MAPK y los flujos de calcio, que coordinan la quimiotaxis, la dinámica de adhesión y la organización del tejido linfoide. El tráfico y el posicionamiento dependientes de CXCR5 son fundamentales para la inmunidad humoral, la maduración de la afinidad y la neogénesis linfoide, y la señalización alterada de CXCR5/BLR1 se estudia en la desregulación inmunitaria y en neoplasias de la estirpe de células B. Además, la expresión de CXCR5 en células T circulantes se utiliza ampliamente para evaluar fenotipos similares a los de las células T colaboradoras foliculares y sus funciones en la inflamación y la autoinmunidad.

Blr1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CXCR5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CXCR5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CXCR5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CXCR5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.