Plásmido Doble Nickase (h) BLM hydrolase: sc-404411-NIC

BLMH codifica la hidrolasa de bleomicina, una aminopeptidasa citosólica de cisteína que cataliza el procesamiento de péptidos en el extremo N-terminal y contribuye al recambio intracelular de proteínas y péptidos. BLMH participa en la proteostasis general y en el metabolismo de aminoácidos, y se ha relacionado con el procesamiento de péptidos bioactivos, incluido el amiloide-β, lo que vincula su actividad con vías relevantes para la neurodegeneración y las respuestas celulares al estrés. La expresión o actividad alteradas de BLMH se han investigado en contextos de estrés oxidativo, señalización inflamatoria y sensibilidad diferencial a la exposición a bleomicina, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de desintoxicación y catabolismo de péptidos. Como enzima de expresión amplia, BLMH sirve como modelo para analizar cómo la función de peptidasas citosólicas se integra con las redes de control de calidad proteica.

BLM hydrolase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BLMH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BLMH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BLMH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BLMH alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.