betaKlotho Lentiviral Activation Particles (h): sc-401614-LAC

Das humane KLB-Gen kodiert betaKlotho, einen single-pass-Transmembran-Korezeptor, der der endokrinen FGF-Signalübertragung Ligandenspezifität verleiht, insbesondere für FGF19/FGF15 und FGF21. Durch die Bildung von Rezeptorkomplexen mit FGFRs reguliert betaKlotho MAPK/ERK- und PI3K/AKT-gekoppelte transkriptionelle Programme, die die Gallensäurehomöostase, den Lipid- und Glukosestoffwechsel sowie die Energiebilanz steuern. Die KLB-Expression ist in Stoffwechselgeweben wie Leber und Fettgewebe angereichert, wo sie nährstoffabhängige Signalwege und endokrines Crosstalk prägt. Eine veränderte betaKlotho-Aktivität oder -Expression wurde mit metabolischer Dysregulation und der Biologie damit assoziierter Erkrankungen in Verbindung gebracht, was KLB zu einem zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien hepatometabolischer Signalwege macht.

betaKlotho Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente KLB-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

betaKlotho Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der KLB-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen betaKlotho-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen KLB-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.