beta Actin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418965

Descripción general

Actb codifica la beta‑actina murina, una proteína del citoesqueleto altamente conservada que se polimeriza en microfilamentos para sostener la forma celular, la polaridad y la estabilidad mecánica. La dinámica de la beta‑actina impulsa procesos fundamentales como la citocinesis, el tráfico vesicular y la migración celular mediante la regulación coordinada de la nucleación, la ramificación y el recambio de actina en vías que involucran GTPasas de la familia Rho y proteínas de unión a actina. Más allá de sus funciones estructurales, la remodelación de actina influye en programas transcripcionales y en la transducción de señales al modular la mecanotransducción y los reservorios de actina nuclear. La desregulación de la organización de la actina se ha implicado ampliamente en modelos experimentales de defectos del desarrollo, reparación deficiente de heridas, cambios en la motilidad de células inmunes e invasión de células tumorales, lo que convierte a Actb en un locus de referencia clave en estudios de biología celular y de mecanismos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO beta Actin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Actb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Actb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Actb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína beta Actin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Actb para la investigación de la señalización de beta Actin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Actb críticos para la función de beta Actin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Actb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido beta Actin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido beta Actin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Actb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR beta Actin (m) y el plásmido HDR beta Actin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Actb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Actb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.