Plasmide Double Nickase (h) beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3: sc-404570-NIC

ATP1B3 code la sous-unité bêta 3 de la Na⁺/K⁺-ATPase, un complexe d’ATPase de type P situé à la membrane plasmique, essentiel au maintien des gradients de Na⁺ et de K⁺ qui soutiennent le potentiel de membrane, l’équilibre osmotique et le transport actif secondaire. Au-delà de l’homéostasie ionique, les sous-unités de la Na⁺/K⁺-ATPase participent à l’assemblage et au trafic de la pompe et peuvent moduler des voies de signalisation liées à l’adhérence cellulaire, à la migration et au contrôle de la croissance. L’expression d’ATP1B3 et la fonction de la pompe recoupent des processus tels que la polarité épithéliale, l’excitabilité neuronale et les réponses au stress via une régulation, dépendante des ions, de transporteurs et de kinases. Une dérégulation de la composition en sous-unités de la Na⁺/K⁺-ATPase a été associée à une signalisation proliférative altérée et à des dysfonctionnements tissulaires, faisant d’ATP1B3 une cible utile pour des études mécanistiques sur le transport membranaire et les interactions entre voies de signalisation.

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP1B3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP1B3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP1B3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP1B3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.