BECN1/Beclin-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400139-LAC

BECN1 codifica Beclin-1, un’impalcatura centrale dei complessi della fosfatidilinositolo 3-chinasi di classe III (PI3KC3/VPS34) che avviano la nucleazione dell’autofagosoma e coordinano il flusso autofagico. Attraverso interazioni con ATG14, UVRAG, AMBRA1 e le proteine della famiglia BCL2, Beclin-1 integra il sensing dei nutrienti e i segnali di stress per regolare l’autofagia, il traffico endo-lisosomiale e la dinamica delle membrane. L’autofagia dipendente da BECN1 contribuisce al controllo di qualità mitocondriale, alla proteostasi e alle risposte dell’immunità innata, collegandola a vie che governano la sopravvivenza cellulare e l’infiammazione. La disregolazione di BECN1 e dei complessi di Beclin-1 è associata ad alterazioni dell’autofagia nella biologia del cancro, nella neurodegenerazione, nelle infezioni e in altri disturbi in cui la funzione lisosomiale e l’adattamento allo stress risultano compromessi.

Le particelle di attivazione lentivirale BECN1/Beclin-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BECN1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BECN1/Beclin-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BECN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BECN1/Beclin-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BECN1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.