BDNF Double Nickase Plasmid (m): sc-419319-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BDNF Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BDNF Double-Nickase-Plasmid (m) und BDNF Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Bdnf abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: pro BDNF: sc-65514
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BDNF Double Nickase Plasmid (m) | sc-419319-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BDNF Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419319-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Bdnf** kodiert den vom Gehirn abgeleiteten neurotrophen Faktor (**BDNF**), ein sezerniertes Neurotrophin, das für das Überleben, die Differenzierung und die aktivitätsabhängige synaptische Plastizität von Neuronen essenziell ist. Nach der Bindung an **TrkB (NTRK2)** aktiviert BDNF nachgeschaltete **MAPK/ERK**-, **PI3K–AKT**- und **PLCγ**-Signalwege, um Neuritenauswachsung, Langzeitpotenzierung und transkriptionelle Programme zu regulieren, die mit der Reifung neuronaler Schaltkreise verknüpft sind. Im ZNS und in peripheren Geweben beeinflusst BDNF zudem Neurogenese und metabolische Homöostase über Neuron-Glia- sowie neuroendokrine Interaktionen. Veränderte BDNF-Expression oder -Signalübertragung wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen, stressbezogenem Verhalten und einer erhöhten Anfallsanfälligkeit in Verbindung gebracht, wodurch **Bdnf** ein zentrales Ziel für mechanistische Studien zur Gehirnfunktion und zu krankheitsrelevanten Signalwegen darstellt.
BDNF Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Bdnf-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Bdnf abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Bdnf-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Bdnf-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.