BCMO1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405374-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BCMO1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BCMO1 Double-Nickase-Plasmid (h) und BCMO1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BCO1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BCMO1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405374-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BCMO1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405374-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **BCO1** kodiert die **β-Carotin-15,15′-Monooxygenase 1 (BCMO1)**, ein zytosolisches Enzym, das die zentrale Spaltung von mit der Nahrung aufgenommenem **β-Carotin** katalysiert und dabei **Retinal** erzeugt, einen direkten Vorläufer der **Retinsäure**. Über die Steuerung der Verfügbarkeit von Retinoiden beeinflusst BCMO1 retinsäureabhängige Transkriptionsprogramme, die die Epithel-Differenzierung, die embryonale Entwicklung sowie die immunologische und metabolische Homöostase regulieren. Die Aktivität von BCO1 überschneidet sich mit Signalwegen der Carotinoidaufnahme und des Lipidstoffwechsels und verknüpft so den Nährstoffstatus mit der Signalübertragung über nukleäre Rezeptoren. Ein veränderter Carotinoid- und Retinoidstoffwechsel wurde mit Unterschieden im Vitamin-A-Status und mit Merkmalen in Zusammenhang gebracht, die für die okuläre und metabolische Physiologie relevant sind, wodurch BCO1 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien darstellt.
BCMO1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BCO1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BCO1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BCO1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BCO1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.