Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Bcl-w Double Nickase Plasmid (h): sc-402639-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Bcl-w Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Bcl-w Double-Nickase-Plasmid (h) und Bcl-w Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BCL2L2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Bcl-w: sc-293236
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Bcl-w Double Nickase Plasmid (h) | sc-402639-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Bcl-w Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402639-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCL2L2 kodiert das antiapoptotische Bcl-2-Familienprotein Bcl-w, einen Regulator der intrinsischen Apoptose an der äußeren Mitochondrienmembran, der die Freisetzung von Cytochrom c hemmt, indem er proapoptotischen BH3-only-Proteinen entgegenwirkt und die Porenbildung durch BAX/BAK begrenzt. Über die Kontrolle der mitochondrialen Integrität beeinflusst Bcl-w die Schwellenwerte für die Caspase-Aktivierung und integriert Überlebenssignale nachgeschaltet an zelluläre Stressantworten, Wachstumsfaktorentzug und metabolische Störungen. Eine veränderte BCL2L2-Expression wurde mit fehlregulierten Programmen des Zellüberlebens in der Krebsbiologie in Verbindung gebracht und zudem in Kontexten wie neuronaler Vitalität und der Aufrechterhaltung von Keimzellen untersucht, in denen die Apoptoseempfindlichkeit die Gewebehomöostase prägt. Diese Funktionen machen BCL2L2 zu einem nützlichen Ziel, um die mitochondriale Apoptose-Schaltkreise, Stressanpassung und den Pathway-Crosstalk mit der MAPK- sowie der PI3K–AKT-Signalisierung zu untersuchen.
Bcl-w Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BCL2L2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BCL2L2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BCL2L2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BCL2L2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.