Plásmido Doble Nickase (h) Bcl-w: sc-402639-NIC

BCL2L2 codifica la proteína antiapoptótica de la familia Bcl-2 Bcl-w, un regulador de la membrana externa mitocondrial de la apoptosis intrínseca que restringe la liberación de citocromo c al antagonizar proteínas proapoptóticas con dominio BH3 únicamente (BH3-only) y al limitar la formación de poros mediada por BAX/BAK. Mediante el control de la integridad mitocondrial, Bcl-w influye en los umbrales de activación de las caspasas e integra señales de supervivencia aguas abajo de respuestas al estrés celular, privación de factores de crecimiento y perturbaciones metabólicas. La expresión alterada de BCL2L2 se ha asociado con programas desregulados de supervivencia celular en biología del cáncer y también se ha estudiado en contextos como la viabilidad neuronal y el mantenimiento de células germinales, donde la sensibilidad a la apoptosis moldea la homeostasis tisular. Estas funciones hacen de BCL2L2 una diana útil para diseccionar la circuitería de la apoptosis mitocondrial, la adaptación al estrés y el diálogo cruzado de vías con la señalización MAPK y PI3K–AKT.

Bcl-w El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BCL2L2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BCL2L2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BCL2L2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BCL2L2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.