Bcl-w CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402639

Übersicht

BCL2L2 kodiert Bcl-w, ein antiapoptotisches Mitglied der BCL-2-Familie, das die Integrität der äußeren Mitochondrienmembran aufrechterhält, indem es proapoptotische Effektoren wie BAX und BAK hemmt. Über die Kontrolle der mitochondrialen Apoptose beeinflusst Bcl-w intrinsische Zelltodentscheidungen als Reaktion auf den Entzug von Wachstumsfaktoren, DNA-Schäden und oxidativen Stress und prägt damit Zellüberleben, Stressanpassung und Gewebehomöostase. Die Aktivität von BCL2L2 überschneidet sich mit Signalwegen, die die mitochondriale Dynamik und Überlebenssignale regulieren, darunter PI3K/AKT- und MAPK-assoziierte Inputs, die auf das Gleichgewicht der BCL-2-Familie einwirken. Eine dysregulierte Expression von Bcl-w wurde in mehreren Tumorkontexten mit veränderten Apoptoseschwellen und Überlebensphänotypen in Verbindung gebracht, die für Onkogenese und Therapieansprechen relevant sind.

Das Bcl-w CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BCL2L2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BCL2L2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BCL2L2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Bcl-w-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BCL2L2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Bcl-w-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BCL2L2-Exone abzielen, die für die Bcl-w-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BCL2L2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Bcl-w CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Bcl-w CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BCL2L2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Bcl-w HDR-Plasmid (h) und Bcl-w HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BCL2L2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BCL2L2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.