Particules Lentivirales d'Activation (m) BAZ2B: sc-436575-LAC

BAZ2B (protéine 2B du domaine « bromodomain adjacent to zinc finger ») est un facteur nucléaire associé à la chromatine qui reconnaît les histones acétylées via son bromodomaine et contribue à la régulation des programmes transcriptionnels par des mécanismes épigénétiques. Il est lié au remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP et peut influencer les états d’expression génique impliqués dans l’identité cellulaire, la prolifération et la différenciation. Dans les systèmes murins, Baz2b a été utilisé pour étudier comment les protéines « lectrices » de la chromatine façonnent les réseaux transcriptionnels du développement et spécifiques des tissus, et comment leur dérégulation perturbe la régulation du génome. La dérégulation de facteurs de chromatine contenant un bromodomaine est largement pertinente en biologie du cancer et dans les phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui fait de Baz2b un nœud utile pour l’exploration, au niveau des voies, du contrôle des gènes piloté par la chromatine.

Les particules d'activation lentivirales BAZ2B (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Baz2b dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BAZ2B (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Baz2b, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BAZ2B. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Baz2b ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.