Plasmide CRISPR d'Activation (m) Barx1: sc-419290-ACT

Le gène murin Barx1 code un facteur de transcription à homéoboîte qui régule les interactions épithélio-mésenchymateuses au cours du développement embryonnaire, avec des rôles majeurs dans la morphogenèse cranio-faciale, les dérivés des arcs branchiaux et l’organogenèse du tube digestif. BARX1 influence la spécification des lignages et la compartimentation tissulaire en modulant des programmes transcriptionnels liés à la signalisation des morphogènes, notamment via des interactions entre les voies BMP et Wnt qui façonnent l’identité régionale. Dans l’estomac, Barx1 intervient dans le contrôle de signaux d’origine mésenchymateuse qui limitent la différenciation épithéliale et soutiennent un développement glandulaire correct. Des réseaux transcriptionnels associés à BARX1 et dérégulés ont été liés à des anomalies du développement et sont fréquemment étudiés dans des modèles de dysmorphogenèse, de mise en place des organes et de modifications du destin cellulaire pertinentes pour la maladie.

Barx1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Barx1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Barx1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Barx1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Barx1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Barx1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Barx1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Barx1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Barx1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Barx1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.