Bag-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402929

Descripción general

BAG3 codifica el cochaperón Bag-3, un regulador inducible por el estrés del control de calidad proteico que se asocia con HSP70 y pequeñas proteínas de choque térmico para coordinar la autofagia selectiva asistida por chaperonas y la proteostasis. Bag-3 influye en la apoptosis y en las vías de señalización de supervivencia celular al modular las interacciones de la familia BCL2 y al vincular la dinámica del citoesqueleto con las respuestas al estrés mediante rutas que incluyen la función autofagia–lisosoma y el recambio dependiente de ubiquitina. En células humanas, la actividad de BAG3 está implicada en el mantenimiento de la integridad mitocondrial y sarcomérica y en la regulación de las respuestas al estrés proteotóxico, mecánico y oxidativo. La desregulación de las redes asociadas a BAG3 se ha relacionado con la miocardiopatía, mecanismos de enfermedades neurodegenerativas y la adaptación al estrés relevante para el cáncer, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la homeostasis y la remodelación bajo estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Bag-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BAG3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BAG3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BAG3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Bag-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BAG3 para la investigación de la señalización de Bag-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de BAG3 críticos para la función de Bag-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BAG3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Bag-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Bag-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BAG3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Bag-3 (h) y el plásmido HDR Bag-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BAG3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BAG3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.