BACE2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425013

Übersicht

Bace2 kodiert die murine β‑Site‑APP‑spaltende Enzym‑2 (BACE2), eine Aspartylprotease des Typ‑I‑Transmembranproteins, die an der regulierten intramembranären Proteolyse ausgewählter Substrate in sekretorischen und endosomalen Signalwegen beteiligt ist. Die Aktivität von BACE2 beeinflusst die Proteostase und die Verarbeitung von Membranproteinen und steht in Zusammenhang mit vesikulärem Transport, lysosomalem Abbau sowie zellulären Stressantworten, die mit neuronaler und metabolischer Physiologie verknüpft sind. Im zentralen Nervensystem wurde BACE2 im Kontext der Verarbeitung der Amyloid‑Vorläuferprotein‑(APP‑)Familie und der Peptidbildung untersucht und liefert damit Erkenntnisse für die Erforschung von Signalwegen, die an Neurodegeneration beteiligt sind. In peripheren Geweben, einschließlich pankreatischer Inseln, wurde die BACE2‑assoziierte Spaltung von Substraten mit der β‑Zell‑Funktion in Verbindung gebracht, was sie für mechanistische Studien zur Biologie metabolischer Erkrankungen relevant macht.

Das BACE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Bace2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Bace2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Bace2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BACE2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Bace2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BACE2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Bace2-Exone abzielen, die für die BACE2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Bace2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BACE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom BACE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Bace2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BACE2 HDR-Plasmid (m) und BACE2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Bace2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Bace2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.