Plásmido Doble Nickase (h) B7-H3: sc-402032-NIC

CD276 codifica la glicoproteína de superficie inmunorreguladora B7-H3, un miembro de la familia B7 que modula la señalización de las células T y de la inmunidad innata, y que también se asocia con programas intrínsecos de la célula en la biología del cáncer. En tejidos humanos, B7-H3 influye en las redes de citocinas y en interacciones tipo punto de control inmunitario, a la vez que afecta vías relacionadas con la adhesión, la migración y la señalización de supervivencia. La expresión desregulada de CD276 se observa con frecuencia en tumores sólidos y se ha asociado con fenotipos de evasión inmunitaria y con una comunicación alterada con el microambiente tumoral. Estas propiedades convierten a CD276 en una diana útil para estudios mecanísticos de la inmunomodulación y de los circuitos de señalización asociados al tumor.

B7-H3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD276 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD276. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD276. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD276 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.