B7-2 Lentiviral Activation Particles (m): sc-419575-LAC

Cd86 kodiert den kostimulatorischen Rezeptor B7-2 (CD86), ein Typ-I-Membranglykoprotein, das vor allem auf antigenpräsentierenden Zellen wie dendritischen Zellen, Makrophagen und B-Zellen exprimiert wird. B7-2 bindet an CD28 und fördert dadurch die Aktivierung von T-Zellen, die Zytokinproduktion und die klonale Expansion, während die Interaktion mit CTLA-4 zur negativen Rückkopplung und peripheren Toleranz beiträgt. Über diese Rezeptor-Ligand-Kontrollpunkte hilft CD86, adaptive Immunantworten zu formen, und beeinflusst Signalprogramme, die mit der Aktivierung von NF-κB und einer immunmetabolischen Umprogrammierung während der Antigenpräsentation verbunden sind. Eine dysregulierte CD86-Expression wird breit in entzündlichen und autoimmunen Kontexten, in der Transplantationsimmunologie, bei Infektionen und bei der Immunflucht von Tumoren untersucht, da eine veränderte Kostimulation das Gleichgewicht zwischen Effektor- und regulatorischen T-Zellen verschieben kann.

B7-2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Cd86-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

B7-2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Cd86-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen B7-2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Cd86-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.