B7-2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-418032-LAC

CD86 (B7-2) é um membro da superfamília das imunoglobulinas, uma proteína coestimuladora de superfície celular expressa principalmente em células apresentadoras de antígeno (APCs), onde se liga a CD28 e CTLA-4 para modular a ativação de células T, a tolerância e o equilíbrio dos checkpoints imunológicos. Ao acoplar o reconhecimento do antígeno à sinalização coestimuladora, B7-2 influencia a atividade a jusante das vias NF-κB, MAPK e PI3K/AKT e molda a produção de citocinas e a diferenciação de células T. Alterações na expressão de CD86 têm sido associadas à desregulação da ativação imune e de programas de apresentação de antígeno observados em contextos de inflamação autoimune, evasão imune tumoral e infecções crônicas. Essas propriedades tornam o CD86 uma ferramenta útil para dissecar a comunicação APC–célula T, a biologia de checkpoints e o controle transcricional dos componentes da sinapse imune.

As Partículas de Ativação Lentivirais B7-2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CD86 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais B7-2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CD86, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de B7-2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CD86 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.