Plásmido CRISPR de Activación (h) B7-1: sc-401971-ACT

CD80 humano (B7-1) es un ligando coestimulador de la superfamilia de las inmunoglobulinas que se expresa principalmente en células presentadoras de antígeno, donde se une a CD28 y CTLA-4 en los linfocitos T para modular la activación, la proliferación y la producción de citocinas. Al modelar la formación de la sinapsis inmunológica e integrar señales que complementan el reconocimiento del TCR, B7-1 influye en las vías posteriores que controlan la diferenciación efectora y la tolerancia periférica. La expresión desregulada de CD80 se ha implicado en la activación inmunitaria aberrante y en mecanismos de tolerancia alterados observados en diversos trastornos autoinmunes e inflamatorios, y con frecuencia se evalúa en inmunología tumoral como un determinante de la capacidad de presentación de antígenos. In vitro, CD80 sirve como un marcador clave y un nodo funcional en estudios de maduración de células dendríticas, polarización de macrófagos y cebado de linfocitos T.

B7-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD80 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

B7-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD80 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD80, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de B7-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD80 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de B7-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía B7-1 en células tumorales con expresión de CD80 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.