Particules Lentivirales d'Activation (h) ATRX: sc-400454-LAC

L’ATRX humain code un facteur de remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP, de type SWI/SNF, qui se localise dans l’hétérochromatine et régule la transcription, la dynamique de la chromatine associée à la réplication, ainsi que la stabilité du génome. ATRX coopère avec DAXX pour déposer la variante d’histone H3.3 sur l’ADN répétitif, notamment aux télomères et dans les régions péricentromériques, influençant ainsi le silençage épigénétique et l’accessibilité de la chromatine. Par ses rôles dans les réponses au stress de réplication de l’ADN et dans le maintien de la chromatine télomérique, ATRX affecte des voies qui contrôlent la fidélité mitotique et les programmes de différenciation cellulaire. La dérégulation ou la perte de fonction d’ATRX est associée à des syndromes du développement et est fréquemment observée dans des tumeurs présentant un allongement alternatif des télomères (ALT), reliant ATRX à la biologie des télomères et à des états épigénétiques oncogéniques.

Les particules d'activation lentivirales ATRX (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ATRX dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ATRX (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ATRX, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ATRX. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ATRX ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.