Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP7A (m): sc-419259

Présentation

Atp7a code ATP7A, un transporteur du cuivre de type ATPase P qui régule la distribution intracellulaire du cuivre en navettant entre le réseau trans-Golgi et la membrane plasmique en fonction des niveaux de cuivre. En fournissant du cuivre aux enzymes de la voie sécrétoire et en favorisant l’efflux du cuivre, ATP7A soutient des processus dépendants du cuivre, notamment le contrôle du stress oxydatif, la réticulation de la matrice extracellulaire et l’homéostasie du fer via la maturation de cuproenzymes. L’activité d’ATP7A s’inscrit à l’interface du trafic vésiculaire, de l’homéostasie des ions métalliques et des voies de signalisation redox, et son dysfonctionnement perturbe l’équilibre du cuivre aux niveaux systémique et cellulaire. Dans des modèles murins, l’altération de la fonction d’Atp7a est utilisée pour étudier les mécanismes sous-jacents à des phénotypes neurodéveloppementaux et du tissu conjonctif dépendants du cuivre, ainsi que des réponses plus larges au stress métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP7A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Atp7a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Atp7a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Atp7a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATP7A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Atp7a pour l'étude de la signalisation de ATP7A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Atp7a essentiels à la fonction de ATP7A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Atp7a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ATP7A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ATP7A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Atp7a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ATP7A plasmide HDR (m) et le ATP7A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Atp7a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Atp7a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.