Plásmido Doble Nickase (h) ATP6E: sc-404046-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ATP6E consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ATP6E (h) y el plásmido de doble nickasa ATP6E (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATP6V1E1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ATP6E Anticuerpo (G-3): sc-514143
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ATP6E | sc-404046-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ATP6E | sc-404046-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1E1 codifica la subunidad E1 (ATP6E) de la H\+-ATPasa vacuolar (V-ATPasa) del dominio periférico V1, una ATPasa rotatoria multisubunidad que impulsa la translocación de protones para acidificar endosomas, lisosomas y otros compartimentos intracelulares. Al controlar el pH de los orgánulos, la actividad de la V-ATPasa regula la endocitosis mediada por receptores, la degradación lisosomal, la autofagia, el procesamiento de antígenos y el tráfico vesicular, con efectos posteriores sobre la detección de nutrientes y las vías de señalización acopladas al transporte de membrana. La alteración de la composición o la función de las subunidades de la V-ATPasa puede desestabilizar la homeostasis celular y se ha vinculado con trastornos hereditarios de la acidificación y fenotipos del neurodesarrollo, así como con cambios en la proteostasis y en las respuestas al estrés metabólico. Por lo tanto, ATP6V1E1 es un locus útil para estudiar la regulación dependiente del pH de la dinámica de membrana y la función de los orgánulos en células humanas.
ATP6E El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP6V1E1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP6V1E1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP6V1E1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP6V1E1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.