ATP5J Lentiviral Activation Particles (m): sc-419251-LAC

Atp5j kodiert ATP5J, eine kleine akzessorische Untereinheit der mitochondrialen F1F0-ATP-Synthase (Komplex V), die den Zusammenbau und die Stabilität des für eine effiziente oxidative Phosphorylierung erforderlichen Holoenzyms unterstützt. Durch seinen Beitrag zur ATP-Produktion und zur Aufrechterhaltung der protonenmotorischen Kraft in den Mitochondrien beeinflusst ATP5J die zelluläre Bioenergetik, das mitochondriale Membranpotenzial und die Redoxhomöostase. Störungen von Komponenten des Komplexes V können den metabolischen Fluss verschieben, reaktive Sauerstoffspezies erhöhen und kompensatorische Stressantworten wie Mitophagie und integrierte Stresssignalwege auslösen. Als zentraler Knotenpunkt des Energiestoffwechsels ist ATP5J für experimentelle Modelle mitochondrialer Dysfunktion relevant, die mit Neurodegeneration, kardiometabolischen Phänotypen und der bioenergetischen Umprogrammierung von Tumoren zusammenhängen.

ATP5J Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Atp5j-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ATP5J Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Atp5j-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ATP5J-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Atp5j-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.