Plásmido Doble Nickase (h) ATP5B: sc-401009-NIC

ATP5B codifica la subunidad β de la ATP sintasa mitocondrial (complejo V), un componente catalítico central que acopla el flujo de protones a través de la membrana mitocondrial interna con la producción de ATP mediante fosforilación oxidativa. Al regular la carga energética celular, ATP5B influye en el potencial de membrana mitocondrial, el equilibrio redox y procesos dependientes de ATP como la homeostasis iónica, la síntesis de proteínas y las respuestas al estrés. La actividad desregulada de la ATP sintasa y la disfunción mitocondrial en un sentido más amplio se asocian con alteraciones en la bioenergética y en el manejo de especies reactivas de oxígeno observadas en diversas enfermedades humanas, incluidas manifestaciones neuromusculares y neurodegenerativas. Como producto génico mitocondrial altamente conservado, ATP5B se utiliza con frecuencia para estudiar el metabolismo mitocondrial y su interacción con la apoptosis y la señalización integrada de estrés.

ATP5B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP5B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP5B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP5B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP5B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.