Plásmido Doble Nickase (h) ATP-citrate synthase: sc-403146-NIC

El gen humano **ACLY** codifica la ATP‑citrato sintasa, una enzima citosólica que convierte el citrato y la CoA en acetil‑CoA y oxaloacetato, conectando el flujo de carbono mitocondrial con la biosíntesis de lípidos y la acetilación de proteínas. Al aportar acetil‑CoA para la síntesis *de novo* de ácidos grasos y colesterol y para la acetilación de histonas, ACLY integra el estado nutricional con la regulación metabólica y epigenética. La actividad de ACLY se relaciona con la glucólisis, el ciclo del TCA y las redes reguladoras de esteroles, influyendo en la biogénesis de membranas y el equilibrio redox. La desregulación de la expresión o del flujo de ACLY se ha asociado con estados metabólicos alterados observados en biología del cáncer, resistencia a la insulina y señalización inflamatoria, lo que la convierte en una diana útil para estudiar fenotipos dependientes del metabolismo.

ATP-citrate synthase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACLY en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACLY. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACLY. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACLY alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.