ATP-citrate synthase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430516

Descripción general

El gen **Acly** de ratón codifica la **ATP‑citrato sintasa (ACLY)**, una enzima citosólica que convierte el citrato y la CoA en **acetil‑CoA** y **oxaloacetato**, conectando el flujo de carbono mitocondrial con el metabolismo citoplasmático. Al aportar acetil‑CoA para la síntesis *de novo* de ácidos grasos y colesterol, ACLY favorece la lipogénesis y la biogénesis de membranas, y también contribuye a las reservas de acetil‑CoA utilizadas para la acetilación de proteínas e histonas. Esta actividad integra la detección de nutrientes con vías que controlan el acoplamiento entre la glucólisis y el ciclo TCA, la homeostasis lipídica y la regulación epigenética de la expresión génica. La producción desregulada de acetil‑CoA dependiente de ACLY se ha asociado con cambios en la remodelación metabólica, la señalización inflamatoria y fenotipos relacionados con la proliferación en modelos relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATP-citrate synthase (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Acly en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Acly junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Acly tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATP-citrate synthase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Acly para la investigación de la señalización de ATP-citrate synthase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Acly críticos para la función de ATP-citrate synthase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Acly para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ATP-citrate synthase CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ATP-citrate synthase CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Acly. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATP-citrate synthase (m) y el plásmido HDR ATP-citrate synthase (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Acly para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Acly definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.