Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP-citrate synthase (m): sc-430516

Présentation

Le gène **Acly** de la souris code l’ATP‑citrate synthase (ACLY), une enzyme cytosolique qui convertit le citrate et la CoA en acétyl‑CoA et oxaloacétate, reliant le flux de carbone mitochondrial au métabolisme cytoplasmique. En fournissant l’acétyl‑CoA nécessaire à la synthèse *de novo* des acides gras et du cholestérol, ACLY soutient la lipogenèse et la biogenèse des membranes, et contribue également aux réserves d’acétyl‑CoA utilisées pour l’acétylation des protéines et des histones. Cette activité intègre la détection des nutriments avec des voies qui contrôlent le couplage glycolyse–cycle de l’acide citrique (TCA), l’homéostasie lipidique et la régulation épigénétique de l’expression génique. Une production d’acétyl‑CoA dépendante d’ACLY dérégulée a été associée à un remodelage métabolique altéré, à une signalisation inflammatoire et à des phénotypes liés à la prolifération dans des modèles pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP-citrate synthase (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acly dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acly, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acly à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATP-citrate synthase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acly pour l'étude de la signalisation de ATP-citrate synthase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acly essentiels à la fonction de ATP-citrate synthase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acly pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ATP-citrate synthase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ATP-citrate synthase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acly. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ATP-citrate synthase plasmide HDR (m) et le ATP-citrate synthase (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acly pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acly définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.