Atm Lentiviral Activation Particles (h): sc-400192-LAC

Das humane ATM-Gen kodiert die Serin/Threonin-Kinase ATM, einen zentralen Regulator der DNA-Schadensantwort, der durch Doppelstrangbrüche rasch aktiviert wird. ATM koordiniert die Checkpoint-Signalübertragung durch Phosphorylierung wichtiger Substrate, darunter TP53, H2AX, CHEK2 und KAP1/TRIM28, und integriert dabei die Auswahl des Reparaturwegs, Antworten auf Replikationsstress sowie die Zellzykluskontrolle. Dieses Signalnetzwerk ist mit homologer Rekombination, nicht-homologem End-Joining und Chromatin-Remodeling verknüpft, um die Genomstabilität zu erhalten. Eine veränderte ATM-Funktion ist eng mit Radiosensitivität und einer erhöhten Krebsanfälligkeit verbunden, wodurch ATM ein häufig genutzter Knotenpunkt für die Untersuchung von Genomerhalt, Stresssignalwegen und Tumorsuppressor-Pathways in menschlichen Zellen ist.

Atm Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ATM-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Atm Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ATM-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Atm-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ATM-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.