Plásmido Doble Nickase (h) Atg9a: sc-408011-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Atg9a consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Atg9a (h) y el plásmido de doble nickasa Atg9a (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATG9A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Atg9a Anticuerpo (F-3): sc-518179
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Atg9a | sc-408011-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Atg9a | sc-408011-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG9A codifica Atg9a, el único factor central de la autofagia con múltiples pasos transmembrana necesario para una biogénesis eficiente de autofagosomas. Atg9a transita entre la red trans-Golgi, los endosomas y los sitios de ensamblaje del fagóforo para favorecer la entrega y la remodelación de membranas, coordinando etapas tempranas de la macroautofagia y de las vías de autofagia selectiva. A través de sus funciones en el tráfico vesicular, el manejo de lípidos y el recambio dependiente de lisosomas, ATG9A influye en la proteostasis y en la adaptación celular al estrés por escasez de nutrientes. La autofagia dependiente de ATG9A desregulada se ha asociado con la neurodegeneración, la biología de las infecciones y la tolerancia al estrés relevante para el cáncer, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de fenotipos vinculados a la autofagia.
Atg9a El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATG9A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATG9A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATG9A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATG9A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.