Plásmido Doble Nickase (h) Atg4b: sc-404173-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Atg4b consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Atg4b (h) y el plásmido de doble nickasa Atg4b (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATG4B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Atg4b Anticuerpo (231CT21.1.7): sc-517310
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Atg4b | sc-404173-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Atg4b | sc-404173-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG4B codifica Atg4b, una proteasa de cisteína que procesa proteínas de la familia ATG8, incluidas LC3 y GABARAP, preparándolas para su lipidación y reciclándolas mediante deslipidación durante la maduración del autofagosoma. A través de estos pasos, Atg4b regula el flujo autofágico, la mitofagia y la eliminación de proteínas y orgánulos dañados, lo que la vincula con la adaptación al estrés celular y la homeostasis metabólica. La modulación de la vía de la autofagia por ATG4B se entrecruza con la señalización de mTOR y AMPK e influye en la presentación de antígenos y en las respuestas inmunitarias innatas. La actividad desregulada de ATG4B y las dinámicas alteradas de la autofagia se han asociado con la biología del cáncer, la neurodegeneración y fenotipos inflamatorios, lo que convierte a ATG4B en un nodo útil para estudios mecanísticos de la proteostasis.
Atg4b El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATG4B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATG4B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATG4B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATG4B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.